Wbudowany jądrowy korektor rdzeniowy 1 reguluje wchłanianie cholesterolu przez szlak kierowany TR (1 ad 9

Pod koniec tego okresu odchody zebrano, wysuszono i zważono. Dwie 200-mg próbki z 3-dniowej kolekcji zostały użyte do ekstrakcji i pomiaru kałowych kwasów żółciowych i cholesterolu. Całkowity cholesterol wyekstrahowano za pomocą metody Folcha, jak opisano powyżej i zmierzono za pomocą zestawu kolorymetrycznego (Stanbio). Wszystkie kwasy żółciowe ekstrahowano w etanolu zgodnie z metodami opisanymi przez Locket i Gallaher (62) i zmierzono za pomocą zestawu do oznaczania całkowitego kwasu żółciowego (BIOQUANT). Wielkość i skład basenów soli żółciowej. Zwierzęta głodzono przez noc i uśmiercano przez uduszenie CO2. Wątroba, woreczek żółciowy i jelito cienkie wycięto en bloc, homogenizowano w 50 ml etanolu i inkubowano w temperaturze 60 ° C przez noc. Ekstrakty odwirowano i fazę ciekłą wysuszono i ponownie zawieszono w metanolu: H20 (75:25). Gatunki soli żółciowych analizowano za pomocą HPLC stosując kolumnę ODS Beckman Ultrasphere (4,6 mm x 250 mm, 5 .m, faza ruchoma metanol: 0,01 M KH2PO4 75:25 obj: obj., PH 5,35), jak opisano wcześniej (59). Hydrofobowy wskaźnik soli żółciowej oznaczono według Heumana (63). Absorpcja cholesterolu w jelitach. Chłonność cholesterolu mierzono za pomocą opisanej metody podwójnego izotopu osocza (26-28). Aby uzyskać szczegółowe informacje, patrz Dodatkowe metody. Pierwotna hodowla hepatocytów i szybkość syntezy cholesterolu. Pierwotne hepatocyty izolowano od 9 do 12-tygodniowych samców myszy ze wskazanymi genotypami, stosując standardową technikę trawienia kolagenazy. Szybkość syntezy lipidów mierzono w hodowlach hepatocytów metodą wody trytowanej (64). Eksperymenty przeprowadzono w co najmniej 3 studzienkach zawierających hepatocyty izolowane od tych samych zwierząt. Aby uzyskać szczegółowe informacje, patrz Dodatkowe metody. Ilościowa reakcja PCR w czasie rzeczywistym. PCR ilościowy w czasie rzeczywistym (QPCR) przeprowadzano stosując standardowe procedury i testy ekspresji TaqMan Gene Expression zakupione od Life Technologies. Wszystkie dane przedstawiono jako krotność ekspresji w grupie kontrolnej Lxra + / + Ncor1flox / flox chow-fed. Aby uzyskać szczegółowe informacje, patrz Dodatkowe metody. Generowanie zwierząt z nadekspresją biotynylowanego hTRa1. Szczegóły projektu badania, wytwarzania wirusa i leczenia zwierząt są opisane szczegółowo przez Ramadoss i in. (41) i w metodzie dodatkowej. Testy ChIP. Dla każdego eksperymentu użyto 4 wątroby na grupę myszy i połączono chromatynę przed etapem oczyszczania na zasadzie powinowactwa. Łącznie przeprowadzono 5 reakcji wytrącania powinowactwa na każdą pulę chromatyny. Szczegółowy protokół można znaleźć w Ramadoss i in. (41) i metody dodatkowe. Sekwencje starterów podano w Tabeli dodatkowej 2. Statystyki. Analizę statystyczną przeprowadzono przy użyciu programu Prism 5. Różnice między genotypami zostały przetestowane przy użyciu dwuczynnikowej ANOVA z post-testami Bonferroniego, jednoczynnikowej ANOVA, następnie testu wielokrotnego porównania Tukeya lub niesparowanego dwustronnego testu dla ucznia, tam, gdzie było to właściwe. Wszystkie dane są przedstawione jako średnie. SEM. P. 0,05 uznano za znaczące. Zatwierdzenie badania. Wszystkie eksperymenty na zwierzętach zostały zatwierdzone przez Komitet ds. Opieki i Użytku Zwierząt w Beth Israel Deaconess Medical Center. Materiały dodatkowe Zobacz Dodatkowe dane Podziękowania Dziękujemy Davidowi Mangelsdorfowi za Lxra. /. myszy i Christopher K. Glass dla plazmidu Blrp-TEV. Prace te były wspierane przez granty NIH DK078090 i DK056123 (do AN Hollenberg), DK048873 i DK056626 (do DE Cohen) oraz do Centrum Chorób Trawiennych Harvardu (P30 DK034854). Przypisy Konflikt interesów: Autorzy zadeklarowali brak konfliktu interesów. Informacje referencyjne: J Clin Invest. 2014; 124 (5): 1976. 1986. doi: 10,1172 / JCI73419. Obecny adres Ricardo H. Costa-e-Sousa to: Instytut Biofizyki Carlos Chagas Filho, Uniwersytet Federalny w Rio de Janeiro, Rio de Janeiro, RJ, Brazylia.
[patrz też: przetrząsaczo zgrabiarka, rozmowa kwalifikacyjna przykład, ursus 8014 ]
[podobne: pizza hawajska składniki, wrzodziejące zapalenie jelita grubego objawy, salon ursus ]