Wbudowany jądrowy korektor rdzeniowy 1 reguluje wchłanianie cholesterolu przez szlak kierowany TR (1 ad 8

Dane wskazują, że te zmiany są prawdopodobnie spowodowane zwiększoną ekspresją 2 enzymów w szlaku syntezy BA. Cyp27a1 i Cyp3a11. i potencjalnie podwyższoną regulację pompy soli żółciowej Abcb11. Zgodnie z naszymi wcześniejszymi ustaleniami, że NCoR1 odgrywa kluczową rolę w przekazywaniu sygnału przez TR w wątrobie, stwierdziliśmy, że Cyp27a1, Cyp3a11 i Abcb11 są celami TH i zidentyfikowali regiony wiążące TR w regionach regulacyjnych i kodujących tych genów, które pokrywają się z regionami wiążącymi NCoR1 zgłoszonymi przez innych (42). Zatem przerwanie oddziaływań NCoR1-TR prowadzi do zwiększonej ekspresji tych docelowych genów i poprawy homeostazy cholesterolu. Podczas gdy mechanizm ten jest najprawdopodobniej mediowany przez aktywację szlaku regulowanego przez TR. 1, rolę dla TR. w nim pozostaje do wyjaśnienia. Jednak ta ścieżka wyraźnie różni się od tych, które są zaangażowane nie tylko przez obecnie stosowanych agonistów TR1 1, ale także przez T3, który powinien aktywować oba TR. i TR .. Zatem różnice pomiędzy efektami indukowanej ligandem aktywacji TR a podniesieniem represji za pośrednictwem NCoR1 na metabolizm cholesterolu otwierają nową drogę dla strategii terapeutycznych z potencjalnym łączeniem korzystnych efektów aktywacji wielu NR, w tym TR i LXR. Metody Eksperymenty na zwierzętach. Myszy Alb-Cre Ncorflox / flox wytworzone jak opisano uprzednio (20) zostały skrzyżowane z Lxra. /. myszy (dar David J. Mangelsdorf, Wydział Farmakologii, University of Texas Southwestern Medical Center, Dallas, Texas, USA) w celu uzyskania Lxra + /. Zwierzęta Alb-Cre Ncorflox / flox, które zastosowano jako hodowcy w celu wytworzenia Lxra + / + Ncor1flox / flox (kontrola), Lxra + / + Alb-Cre Ncorflox / flox (L-y ID), Lxra . /. Ncorflox / flox (kontrola Lxraa / y) i Lxra. /. Alb-Cre Ncorflox / flox (Lxra. / L-y-ID) jako miot kocurów. Myszy utrzymywano na mieszanym podłożu C57BL / 6; 129S. Zwierzęta trzymano w temperaturze 22 ° C do 24 ° C w 12-godzinnym cyklu światła / 12-godzinnej ciemności i podawano karmę i wodę ad libitum. Szczegóły podano w Dodatkowych metodach. Analiza histologiczna. Próbki wątroby utrwalono w 4% formalinie. Zatopienie, pocięcie i barwienie skrawków parafinowych przeprowadzono za pomocą standardowych technik w AML Labs Inc. (Baltimore, Maryland, USA). Lipidy w osoczu i enzymy wątrobowe. Całkowity cholesterol, triglicerydy, aminotransferaza alaninowa (ALT) i aminotransferaza asparaginianowa (AST) zostały zmierzone przy użyciu standardowych testów zakupionych w Laboratorium Stanbio. Surowicę kwasów żółciowych mierzono za pomocą 3-. Zestaw kolorymetrycznych kwasów żółciowych opartych na HSD (BIOQUANT) na bazie HSD. Lipoproteiny osocza w zebranych próbkach od 6 do 9 zwierząt na grupę frakcjonowano metodą szybkiej białkowej chromatografii cieczowej z użyciem kolumny Superose 6 HR10 / 30 (Amersham Biosciences), a stężenia cholesterolu określano we frakcjach, jak opisano wcześniej (58, 59). Ponieważ frakcjonowanie przeprowadzono na połączonych próbkach, nie przeprowadzono statystycznej analizy wyników. Test produkcyjny VLDL in vivo. Myszy głodzono przez 5 godzin i wstrzykiwano przez żyłę ogonową 600 mg / kg Tyloxapolu (Sigma-Aldrich) w celu zablokowania klirensu VLDL. Próbki krwi pobierano przed i 2 godziny po wstrzyknięciu. Stężenie triglicerydów w osoczu mierzono za pomocą enzymatycznego testu kolorymetrycznego z Laboratorium Stanbio. Zawartość cholesterolu w całym ciele. Ekstrakcję przeprowadzono w sposób opisany przez Bradley i in. (60). W skrócie, zwłoki myszy, z wyjątkiem wątroby, pęcherzyka żółciowego, żołądka i jelita cienkiego, umieszczono w zlewce zawierającej 150 ml etanolu i 10 g KOH i pozostawiono do autodigestowania przez 4 dni. Następnie zawartość przesączono i objętość doprowadzono do 100 ml etanolem. Stężenie cholesterolu mierzono w ekstraktach przy użyciu zestawu kolorymetrycznego z firmy Stanbio. Stężenia cholesterolu i żółci w drogach żółciowych i kwasu żółciowego. Lipidy ekstrahowano metodą Folcha (61). Około 150 mg zamrożonych wątrób lub 5 ul żółci pęcherzyka żółciowego ekstrahowano w mieszaninie chloroform: metanol (2: 1). Po dodaniu 0,9% NaCl i odwirowaniu, górną fazę metanol / woda zastosowano do pomiaru stężenia kwasów żółciowych za pomocą zestawu do oznaczania całkowitego kwasu żółciowego (BIOQUANT). Fazę organiczną wysuszono, a następnie rozpuszczono w butanolu / (Triton X-100: metanol [2: 1]) (30:20); całkowity i wolny cholesterol mierzono za pomocą Cholesterolu E i Free Cholesterol E Kit (Wako Chemicals). Estryfikowane stężenia cholesterolu obliczano jako różnicę między całkowitym i wolnym cholesterolem. Stężenie kwasu żółciowego i cholesterolu w kale. Zwierzęta trzymano pojedynczo w klatkach przez 3 dni i rejestrowano masę ciała i całkowite spożycie pokarmu
[hasła pokrewne: czy pasujemy do siebie test, prawo wykonywania zawodu lekarza, wrzodziejące zapalenie jelita grubego objawy ]
[przypisy: rehabilitacja po złamaniu szyjki kości udowej, szczecin szpital wojskowy, rozmowa kwalifikacyjna przykład ]