Warianty utraty funkcji w śródbłonkowej lipazie są przyczyną podwyższonego cholesterolu HDL u ludzi cd

Aktywność każdego wariantu EL zbadano względem syntetycznego substratu fosfolipidowego dipalmitoilofosfatydylocholiny, jak opisano wcześniej (32) i przeciwko izolowanemu ludzkiemu HDL3, jak opisano wcześniej (33). Każdy test przeprowadzono trzykrotnie, a transfekcje powtarzano co najmniej 3 oddzielne czasy. Każdy wariant EL zidentyfikowany wyłącznie w grupie z wysoką HDL wykazywał znaczący spadek aktywności lipolitycznej w porównaniu z WT EL, przy czym większość wariantów miała prawie niewykrywalną aktywność w obu testach funkcji lipazy (Figura 1, D i E). Stowarzyszenie wspólnych niesonimicznych wariantów LIPG z HDL-C i analizą funkcjonalną. Nie jest zaskakujące, że wspólny wariant Thr111 i wariant Asn396Ser o niskiej częstotliwości, które wcześniej opisywaliśmy u osób o mieszanym pochodzeniu europejskim (16), zostały zidentyfikowane w obu grupach sekwencyjnych. Thr111 występował na podobnej częstotliwości w obu grupach, podczas gdy Asn396Ser został znaleziony ze znacznie większą częstością w grupie z wysokim HDL-C (P = 0,007; Tabela 3). Podsumowanie pomiarów stężenia lipidów i lipoprotein na czczo u pacjentów z sekwencjami o wysokim poziomie HDL z wariantem LipG Asn396Ser są dostępne w Tabeli dodatkowej 1. PolyPhen (30) przewidział wariant Asn396Ser jako potencjalnie szkodliwy w odniesieniu do normalnej funkcji EL, ale przewidział, że wariant Thr111 ma mieć łagodny wpływ na normalną funkcję EL. Analiza dopasowania przy użyciu ClustalW (31) ujawniła, że Asn396 jest wysoce konserwatywny u wszystkich gatunków i sąsiaduje z N-połączonym miejscem glikozylacji, które jest konserwowane w obrębie rodziny lipaz triglicerydowych (Figura 2A). Przeciwnie, Thr111 nie jest konserwatywny dla różnych gatunków, a wariant Ile111 znajduje się w genach gryzoni LIPG. Rysunek 2Funkcja funkcjonalna wspólnego wariantu Thr111 i wariantu Asn396Ser niskiej częstotliwości. (A) Schemat struktury białka EL, jak opisano na Figurze 1. Thr111Ile i Asn396Ser wytworzono przez ukierunkowaną mutagenezę i przejściowo eksprymowano stosując komórki 293 w obecności heparyny. (B) Wyrażone EL wizualizowano przez immunoblotting kondycjonowanej pożywki i lizatu komórkowego. (C) Pożywki z komórek przejściowo eksprymujących WT EL lub wariant EL w obecności heparyny zebrano i badano pod kątem hydrolizy dipalmitoilofosfatydylocholiny i (D) izolowanego ludzkiego HDL3. Dane aktywności dla wariantów EL znormalizowano do procentu aktywności WT EL. Testy przeprowadzono trzykrotnie, a oddzielne transfekcje powtarzano co najmniej 3 razy. Przedstawione wyniki pochodzą z reprezentatywnego eksperymentu. 1, Thr111Ile; 2, Asn396Ser. * P. 0,001 w porównaniu z WT. (E) Przeniesienie genu somatycznego WT i Asn396Ser EL do męskiego Lipg. /. myszy wykonano przez podawanie AAV2 / 8, niosącego oznaczony transgen przez wstrzyknięcie ip. HDL-C mierzono we wskazanych odstępach czasu. Trójkąty, LacZ (n = 4); kółka, Asn396Ser (n = 3); kwadraty, WT (n = 4). Paski błędów wskazują. SD. Tabela 3 Warianty sekwencji w eksonach LIPG występujące u uczestników z obu skrajnych fenotypowych dystrybucji HDL Formalnie testowano pod kątem asocjacji tych 2 wariantów LIPG z HDL-C w kohorcie Framingham Heart Study Offspring (FHS; n = 1,796) (Tabela 4). ). Wariant Thr111 nie był związany ze stężeniem HDL-C. W przeciwieństwie do tego okazało się, że wariant Asn396Ser jest wysoce znacząco związany z HDL-C, z mniejszym allelem Asn396Ser związanym z około 8 mg / dl wzrostu HDL-C (P = 4 x 10 ~ 5). Asn396Ser był również znacząco związany ze zwiększonymi podfrakcjami HDL2 i HDL3, zwiększonym rozmiarem cząstek HDL, zwiększonymi dużymi cząstkami HDL i zwiększonymi poziomami apoA-I (Tabela 4). Wariant Asn396Ser nie był związany z LDL, triglicerydem, apoB lub rozmiarami innych cząstek lipoprotein, ani wariantu Thr111le nie był powiązany z żadną z tych dodatkowych pomiarów lipidów i lipoprotein (Tabela dodatkowa 3). Tabela 4 Analiza powiązania FHS Próbowaliśmy powtórzyć te odkrycia w kilku innych kohortach, w tym w podgrupie pielęgniarek. Health Study II (NHS II), podzestaw badania kontrolnego Health Professionals (HPFS), kohorty badania cewnikowania University of Pennsylvania (PennCATH) oraz kohorty kontroli przypadków z Universitätsklinikum Hamburg-Eppendorf (UKE Hamburg CC) oraz Badania kliniczne HDL Uniwersytetu Pensylwanii (Penn HDL CC, tabele i 5). Dane statystyczne pochodzące z tych kohort podsumowano za pomocą ważonej metaanalizy z-statystyką. W żadnej z tych kohort nie było Thr111le związane z poziomami HDL-C. W przeciwieństwie do tego Asn396Ser był silnie związany z podwyższonym poziomem HDL-C we wszystkich badanych kohortach (łączna wartość P = 1,7 × 10. 8; Tabela 6)
[więcej w: rozmowa kwalifikacyjna przykład, olej kokosowy organiczny, ursus 8014h ]
[przypisy: ursus koszalin, ursus 8014, nafta kosmetyczna z olejkiem rycynowym ]