Sygnalizacja poprzez CD28 i CTLA-4 kontroluje dwie różne formy anergii komórek T ad 6

Jednak limfocyty T CD4 + z tej samej hodowli, które nie uległy podziałowi po aktywacji, wykazywały wyraźne zmniejszenie ich zdolności do proliferacji w odpowiedzi na ponowną stymulację (Figura 2e, Figura 2o, pierwszy zestaw kolumn). Dane te potwierdzają wyniki naszych poprzednich badań (4) i są również zgodne z eksperymentami, w których hamowanie progresji cyklu komórkowego przez blokadę IL-2 / IL-2R (16), maślan (29) lub rapamycynę (18) indukował anergię w klonowanych komórkach T pomimo obecności kostymulacji CD28. Jednakże rozszerzyliśmy obserwacje z tych badań, które zostały przeprowadzone w warunkach, w których niepowodzenie progresji cyklu komórkowego było indukowane przez egzogenne środki farmakologiczne, do zatrzymania cyklu komórkowego występującego. Normalnie. jako część obserwowanej heterogeniczności odpowiedzi komórek T. Łącznie badania te sugerują, że wtórna reaktywność limfocytów T CD4 + stymulowanych w obecności kostymulacji CD28 zależy od podziału komórek pierwotnych. Komórki T CD4 +, które nie ulegają proliferacji po aktywacji za pośrednictwem TCR / CD28, są oporne na IL-2. W przeciwieństwie do komórek anergizowanych przez sprzężenie TCR w nieobecności sygnałów CD28, komórki T CD4 +, które nie uległy proliferacji podczas pierwotnej stymulacji TCR / CD28 były znacząco oporne na kolejną stymulację IL-2 w porównaniu z komórkami podzielonymi pochodzącymi z tych samych pierwotnych hodowli (Figura 2). , porównaj f i g; rys. 2o, porównaj otwarte i zacienione słupki w drugiej kolumnie). Względna niemożność niepodzielonych komórek T CD4 + do wykorzystania IL-2 jako czynnika wzrostu w tym układzie jest związana ze zwiększonym poziomem p27kip1 po leczeniu IL-2, w porównaniu ze zmniejszonym poziomem p27kip1 obserwowanym w podzielonym podziale CD4 + (fig. 2q, porównaj ścieżki UU i aD3 w pierwszych dwóch panelach). Ta niezdolność do obniżania poziomu p27kip1 w odpowiedzi na IL-2 nie wynika z braku ekspresji receptora IL-2, ponieważ te komórki wykazują prawidłowe poziomy IL-2Ra, IL-2Ra i IL-2Rcc zmierzone przez cytometria przepływowa (4) i inne funkcjonalne konsekwencje sygnalizacji za pośrednictwem IL-2 (3, takie jak aktywacja STAT5 (4) i podwyższenie poziomu Bcl-2 (nasze niepublikowane obserwacje), występują normalnie w tych komórkach. Ponadto stymulacja niezależna od receptora przy użyciu PMA i jonomycyny doprowadziła do porównywalnej regulacji w dół p27kip1 (Figura 2q, trzeci panel) i proliferacji (dane nie pokazane, odnośnik 4) zarówno przez podzielone, jak i niepodzielone podzestawy, co pokazuje, że dalsza maszyna cyklu komórkowego jest obecne i funkcjonalne w niepodzielonych komórkach. Łącznie dane te sugerują, że szlaki transdukcji sygnału prowadzące do progresji cyklu komórkowego są specyficznie oddzielone od receptora IL-2 w tych komórkach, które nie ulegają podziałowi podczas podstawowej aktywacji. Wyniki te sugerują również, że kostymulacja CD28 jest konieczna, ale niewystarczająca do unikania anergii przez limfocyty T CD4 + i dodatkowo podkreśla znaczenie progresji cyklu komórkowego w regulowaniu różnicowania komórek T i funkcji efektorowej. Rozwój niesprawności IL-2 związanej z zatrzymaniem podziału zależy od interakcji CTLA-4 (3 B7 podczas pierwotnej stymulacji. Aby dodatkowo scharakteryzować czynniki oprócz CD28 i podział komórek, które regulują unikanie anergii w limfocytach T CD4 +, skoncentrowaliśmy się na alternatywnym receptorze dla B7 na komórkach T, CTLA-4. W przeciwieństwie do CD28, CTLA-4 negatywnie reguluje odpowiedzi komórek T poprzez hamowanie transkrypcji genu IL-2 i hamowanie ekspansji klonalnej (10, 11). Wykazano również, że CTLA-4 jest ważny dla indukcji tolerancji w kilku modelach eksperymentalnych (12, 14, 30). Aby zbadać, w jaki sposób poszczególne limfocyty T CD4 + odpowiadają na sygnały CTLA-4, hodowaliśmy pierwotne, śledzione CFSE komórki śledziony z kulkami polistyrenu powleczonymi różnymi kombinacjami anty-CD3, anty-CD28 lub anty-CTLA-4 (Figura 3). Stosowane w ten sposób (tj. Unieruchomione na perełkach) mAb anty-CTLA-4 wykazano uprzednio w celu stymulacji receptora CTLA-4 i dostarczenia ujemnego sygnału do komórek T (9). Zgodnie z tym stwierdziliśmy, że sprzężenie TCR i CD28 w nieobecności sygnałów CTLA-4 spowodowało proliferację prawie 80% wejściowych komórek T CD4 + w hodowli, ze średnim odpowiadającym prekursorem generującym między 10 a 11 komórek potomnych. (Figura 3a). Jednak tylko około 45% wejściowych komórek T CD4 + weszło do puli cyklizacyjnej, gdy CTLA-4 było wspólnie usieciowane z TCR i CD28, a mniej niż siedem komórek potomnych zostało wygenerowanych przez przeciętnego respondenta w tych warunkach (Figura 3b). W związku z tym, zaangażowanie CTLA-4 zwiększa prawdopodobieństwo, że pojedyncza komórka T CD4 + nie ulegnie całkowitej proliferacji po pierwotnej aktywacji, a także ogranicza potencjał komórek, które reagują na poddawanie się wielokrotnym podziałom komórkowym. Figura 3Regulacja podziału pierwotnych limfocytów T przez oddziaływania B7a CTLA-4
[hasła pokrewne: rozmowa kwalifikacyjna przykład, okulistyka ceglana katowice, rozdrabniacz uniwersalny ]
[przypisy: okulistyka ceglana katowice, prawo wykonywania zawodu lekarza, polskie towarzystwo medycyny estetycznej ]