Sygnalizacja poprzez CD28 i CTLA-4 kontroluje dwie różne formy anergii komórek T ad 5

Żywe komórki CD4 + zostały następnie posortowane na frakcje, które zostały podzielone dwa lub więcej razy (prawy pas, Pd.) Lub pozostawały niepodzielone podczas okresu hodowli (lewa ścieżka, A U). Komórki poddawano lizie i równoważne ekwiwalenty komórek oceniano pod względem zawartości p27kip1 za pomocą analizy immunoblot. Przedstawione dane są reprezentatywne dla dwóch niezależnych eksperymentów. W przeciwieństwie do naszych przewidywań, zarówno podzielone, jak i niepodzielne populacje komórek T CD4 + z hodowli traktowanych CTLA4Ig były równie niereagujące na restymulację przez TCR / CD28 mierzone przez proliferację (Figura 2, K i I oraz Figura 2o, trzeci zestaw kolumn ). Jednakże proliferację obu populacji limfocytów T CD4 + można przywrócić przez dodanie IL-2 (Figura 2, m i n oraz Figura 2o, czwarty zestaw kolumn). Ten fenotyp (tj. Zmniejszona zdolność do wytwarzania IL-2 i proliferacji w odpowiedzi na re-ligację TCR / CD28, ale stosunkowo nienaruszona odpowiedź na dostarczoną IL-2 egzogennie) bardzo przypomina anergię w klonach komórek T (15). Dlatego limfocyty T CD4 + stymulowane przez sprzężenie TCR przy braku kostymulacji B7 / CD28 istnieją w stanie klonalnej anergii, której nie można uciec przez wejście do puli rowerowej. Wyniki te sugerują, że CD28 może funkcjonować niezależnie od progresji cyklu komórkowego w unikaniu anergii. Co ciekawe, ta forma klonalnej anergii jest związana z niezdolnością do obniżania poziomu inhibitora cyklu komórkowego p27kip1 w odpowiedzi na ponowne ligowanie TCR (Figura 2p). p27kip1 reguluje progresję cyklu komórkowego w komórkach T przez hamowanie aktywności kinazy zależnej od cyklin (CDK) odpowiedzialnej za fosforylację supresora guza siatkówki (Rb), blokując w ten sposób uwalnianie czynnika transkrypcyjnego E2F i ekspresję genów wymaganych do przejście z fazy G1 do fazy S (24, 25). Produktywnie zagruntowane limfocyty T wydzielają IL-2 w odpowiedzi na reaktywację TCR (Figura 1a), która z kolei sygnalizuje degradację p27kip1 (odnośnik 26, Figura 2p, dolny panel, pierwsza i druga ścieżka). Jednakże w limfocytach T z ekspresją CTLA4Ig poziomy p27kip1 pozostawały wysokie po ponownym ligowaniu TCR (Figura 2p, panel dolny, trzecia ścieżka). Stanowi to wadę regulacji w dół, ponieważ zarówno pierwotnie, jak i anergicznie populacje komórek T zawierały porównywalne, wysokie poziomy p27kip1 przed ponowną stymulacją (Figura 2p, górne panele). Podwyższone poziomy p27kip1 w tych anergicznych limfocytach T najprawdopodobniej wynikają z niedostatecznej produkcji IL-2 w odpowiedzi na ponowna stymulację (Figura 1b), ponieważ dodanie egzogennej IL-2 spowodowało skuteczną regulację w dół p27kip1 (Figura 2o, czwarta ścieżka) . Wynik ten może wyjaśniać, dlaczego egzogenna IL-2 jest również w stanie przywrócić zdolność proliferacyjną anergicznych komórek T (odnośnik 27, Figura 2o). Nasze dane nie rozróżniają, czy p27kip1 odgrywa rolę przyczynową w indukcji i / lub utrzymywaniu anergii w naszym modelu, czy po prostu działa jako wskaźnik. potencjału proliferacyjnego. Jednak ostatnio zaproponowano, że p27kip1 jest aktywnym czynnikiem anergii. w klonach ludzkich limfocytów T, które stały się niereagujące przez wiązanie TCR przy braku kostymulacji CD28, ponieważ może swoiście hamować transkrypcję genu IL-2 oprócz hamowania aktywności CDK (28). Dlatego możliwe jest, że podwyższone poziomy p27kip1 mogą reprezentować mechanizm biochemiczny, dzięki któremu anergia klonalna jest utrzymywana w tym modelu pierwotnej niezdolności komórek T i może przyczyniać się do. Głębokości. tolerancji wywołanej blokadą kostymulacyjną. Costymulacja CD28 nie jest wystarczająca do uniknięcia anergii przez pierwotne limfocyty T CD4 +: wymaganie progresji cyklu komórkowego. Wyniki opisane powyżej sugerują, że kostymulacja B7 / CD28 jest bezwzględnie konieczna do uniknięcia anergii, ponieważ nawet limfocyty T CD4 +, które osiągają wielokrotne rundy podziału komórki podczas blokowania kostymulacyjnego, pozostają oporne na reaktywację TCR. Jednak nie było jasne, czy sygnały CD28 same w sobie wystarczają do uniknięcia anergii, czy też inne czynniki mogą dodatkowo regulować unikanie anergii w tym modelu. Aby zbadać, czy progresja cyklu komórkowego jest ważnym regulatorem unikania anergii w warunkach wystarczających sygnałów kostymulacyjnych CD28, komórki T CD4 + zagruntowane w obecności normalnej stymulacji za pośrednictwem B7 sortowano jak powyżej na frakcje, które osiągnęły dwie podziały komórkowe, lub pozostawały niepodzielone przez cały okres hodowli. W tych warunkach zachowanie proliferacyjne poszczególnych komórek T CD4 + znacząco wpłynęło na ich wtórną reakcję. Te limfocyty T CD4 +, które namnażały się podczas pierwotnego bodźca, dobrze się rozmnażały w odpowiedzi na ponowną stymulację (Figura 2d, Figura 2o, pierwszy zestaw kolumn)
[więcej w: szczecin szpital wojskowy, ursus koszalin, olej kokosowy organiczny ]
[więcej w: traumon opinie, ursus 11054 cena, czy pasujemy do siebie test ]