Kumulacja miozyny i miopatia mięśni poprzecznie prążkowanych wynikają z utraty palca 1 i 3 mięśnia cd

Anty-GAPDH zastosowano jako kontrolę. (D) Mikroskopia elektronowa przekrojów podłużnych (lewy górny i dolny) i krzyżowy (górny prawy i środkowy) mięśnia płaszczkowatego wykazała nagromadzenie materiału ziarnistego i nierozwiązane miozyny w miofibrach DKO. Strzałki wskazują mitochondria. Kropkowane linie wskazują na oddzielenie wewnętrznego rdzenia miofiber (poniżej linii) od gromadzącej się miozyny (powyżej linii). Środkowy panel pokazuje powiększenie obszaru w polu w prawym górnym rogu. Groty strzałek wskazują nieprawidłowe linie Z. Dół: w górnej części tego panelu widoczne są miopatie mięśni Z w mięśniach szkieletowych. M, linia M; N, jądro. (E) Plamy NADH z mięśniówki tylnej i piszczelowej pokazują niezorganizowane mitochondria w mięśniu DKO. (F) Zmodyfikowane trichromowe przebarwienie Gomoriego z mięśniówki tylnej i piszczelowej nie wykazuje żadnej miopatii z włókien strzępiastych. Paski skali: 100 .m (A i B); 2 m (D, u góry po lewej i u dołu); 0,5 m (D, górny prawy i środkowy); 20 m (E i F). Nienormalne nagromadzenie miozyny w miofibrach DKO. Analiza białek wyizolowanych z płaszczki myszy WT, MuRF1a / a, MuRF3a / a i DKO metodą SDS-PAGE ujawniła pasmo około 60 kDa, które było specyficzne dla mięśnia DKO (dane nie pokazane). Spektrometria mas zidentyfikowała to pasmo jako fragmenty białek miozynowych, które normalnie migrują przy około 200 kDa (Tabela dodatkowa 1). Immunohistochemia mięśni DKO soleus przy użyciu przeciwciał anty-wolny / wolny MHC i anty-pan-MHCII potwierdziła akumulację obu białek w ich odpowiednich mięśniach mięśniowych (Figura 2B). Białka MHC gromadzone jako amorficzna jednorodna masa otaczająca centralny rdzeń miofibru (Figura 2B). Analiza immunoblot izolowanego białka z mięśni szkieletowych WT i DKO wykazała masową akumulację niezdegradowanego i zdegradowanego a / wolnego MHC w DKO soleus (Figura 2C) i ujawniła, że wzrost białka MHCII był głównie MHCIIa (Figura 2C) w DKO soleus. Mikroskopia elektronowa przeprowadzona na odcinkach soleusa wykazała agregaty białkowe tylko w miofibrach DKO, co prowadziło do redystrybucji mitochondriów wzdłuż scentralizowanego muflera (rysunek 2D). Zostało to potwierdzone przez barwienie NADH (Figura 2E i Dodatkowa Figura 3). Jak zaobserwowano w MSM (20, 21), stwierdziliśmy, że miowłókna DKO uległy degradacji do materiału ziarnistego, który gromadził się wokół centralnego rdzenia miofibru (fig. 2D). Materiał amorficzny zawierał niezwiązane włókna i fragmenty sarkomerów. Pomiary włókien ciągłych w przekrojach poprzecznych i poprzecznych wykazały, że grubość włókien wynosi 15 nm, zgodnie z włóknami miozyny (22), potwierdzając tożsamość materiału ziarnistego jako białka MHC (dane nie pokazane). Zdezorientowane sarkomery widoczne w przekrojach poprzecznych i podłużnych zmutowanego mięśnia szkieletowego DKO miały nienaruszoną strukturę linii M z sąsiadującymi grubymi włóknami, co sugeruje rolę MuRF1 i MuRF3 w obrocie grubych włókien i białek linii M. W przeciwieństwie do tego linia Z była znacznie zmniejszona lub nieobecna (Figura 2D), co sugeruje, że mechanizmy niezależne od MuRF1 i MuRF3 pośredniczą w degradacji białek linii Z. Ponadto w mięśniach szkieletowych myszy DKO zaobserwowano dezorganizację i brak wyrównania, rozmycie, poszerzenie i przerwanie linii Z, zwane streszczeniem linii Z, będącą ogólną cechą wielu zaburzeń miopatycznych (Figura 2D). Aby ustalić, czy miopatia obserwowana w mięśniu DKO przypominała miopatię nemalinową, inne prążkowane zaburzenie mięśni, to oznaczono trichromię Gomori. Wyniki nie wykazały śladów poszarpanych czerwonych włókien, charakterystycznych dla miopatii ciała nemalnego (23) (ryc. 2F i uzupełniająca ryc. 4). Myszy DKO wykazują przerostową kardiomiopatię. Serca myszy DKO były przerostowe, co wskazuje na stres serca (Figura 3, A i B). Echokardiografia wykazała wyraźną redukcję funkcji skurczowej LV, głównie ze względu na powiększenie wymiaru końcowoskurczowego lewej komory, podczas gdy wymiar końcowo-rozkurczowy lewej komory pozostał niezmieniony (ryc. 3C). Podobnie jak w przypadku mięśni szkieletowych, kardiomiocyty zwierząt DKO zawierały wyraźnie rozgraniczoną akumulację subkolumfinalnego białka złożonego z materiału ziarnistego i nierozwiązanych miozyn. Mitochondria ulegały redystrybucji wzdłuż scentralizowanego rdzenia miofiberu (ryc. 3, A i D). Immunoblotting wykazał akumulację a / powolnego białka MHC i produktów jego rozpadu w sercach DKO w porównaniu z myszami MuRF1 (3 (3, MuRF3 (3 / lub WT (Fig. 3E). Przeciwnie, ekspresja P-MHC, dorosłej izoformy miozynowej serca, nie uległa zmianie (Figura 3E). Przedsionkowy czynnik natriuretyczny (ANF), marker stresu kardiologicznego, był zwiększony w sercach DKO w porównaniu z kontrolami z miotu (Ryc. 3F). Fig. Myszy 3DKO wykazują przerostową kardiomiopatię i zmniejszoną czynność serca
[podobne: rehabilitacja po złamaniu szyjki kości udowej, prawo wykonywania zawodu lekarza, szpital na szaserów warszawa ]
[patrz też: prawo wykonywania zawodu lekarza, polskie towarzystwo medycyny estetycznej, ursus 11054 ]