Kumulacja miozyny i miopatia mięśni poprzecznie prążkowanych wynikają z utraty palca 1 i 3 mięśnia ad 7

Chociaż wykazano, że białka MuRF wchodzą w interakcję z nebuliną i troponiną T (17), nasze wyniki z zastosowaniem zmodyfikowanego barwienia trichromem Gomori wskazywały, że fenotyp obserwowany w mięśniu DKO jest głównie związany z zaburzoną degradacją i gromadzeniem się filamentów o grubości miozyny, ale nie-go. Nagromadzenie MHC w mięśniu szkieletowym DKO spowodowało przemieszczenie mitochondriów, co prawdopodobnie doprowadziło do nieefektywnego dostarczania energii do aparatu kurczliwego, co zwiększyło fenotyp w mięśniu DKO. Fenotyp serca obserwowany u myszy DKO składa się ze zwiększonej masy serca, zmniejszonej czynności serca i zwiększonej ekspresji ANF. Ten fenotyp wskazuje na przerostową kardiomiopatię i najprawdopodobniej jest spowodowany nagromadzeniem (3 / powolnego białka MHC w kardiomiocytach. Chociaż opowiadamy się za hipotezą, że wzrost ilości wolnego białka /. MHC jest głównie spowodowany brakiem degradacji zależnej od MuRF1 i MuRF3, jesteśmy świadomi, że ekspresja białka. / Powolnego białka MHC jest również regulowana w górę w odpowiedzi na stres serca. Jest możliwe, że przerost mięśnia sercowego u myszy DKO przyczynia się do akumulacji (3 / powolnego MHC obserwowanego w sercach DKO, dodatkowo pogarszając fenotyp serca myszy DKO. Zanik mięśni towarzyszy różnym klinicznie ważnym chorobom i determinuje jakość życia i śmiertelność pacjentów. Opracowanie nowych strategii terapeutycznych do leczenia tej choroby wymaga dokładnego zrozumienia specyficznych mechanizmów, które prowadzą do degradacji białek sarkomerowych. Rzeczywiście, MuRF1 odgrywa rolę w atrofii mięśniowej (8) i zaproponowano, że inhibitory MuRF mogą być korzystne w leczeniu atrofii mięśni szkieletowych. Jednakże, w oparciu o nasze wyniki przedstawione tutaj i opublikowane wcześniej (10), podawanie nieswoistych inhibitorów MuRF prawdopodobnie wywołuje niepożądane skutki uboczne, szczególnie z powodu gromadzenia się miozyny w komórkach mięśni prążkowanych. Aby być skutecznym terapeutycznie, proponujemy, aby inhibitory MuRF były zaprojektowane tak, by były swoiste dla izoform i specjalnie zakłócać interakcję między białkami MuRF i ich celami. Metody Badania na zwierzętach. Zmutowane myszy MuRF1 (8) i MuRF3 (10) zostały wcześniej opisane. Zwierzęta hodowano w standardowych warunkach i utrzymywano na komercyjnej karmie dla myszy i wodzie ad libitum, o ile nie wskazano inaczej. Środowisko utrzymywano w temperaturze 22 ° C z cyklem 12 godzin światła / 12 godzin ciemności. MuRF1 i MuRF3 podwójnie heterozygotyczne zmutowane myszy były krzyżowane, a otrzymane myszy WT, MuRF1a / a, MuRF3a / a i DKO tej samej płci były używane do kolejnych eksperymentów. Wszystkie eksperymentalne procedury na zwierzętach zostały sprawdzone i zatwierdzone przez Instytucjonalne Komisje ds. Pielęgnacji i Użytkowania Zwierząt w University of Texas Southwestern Medical Center. Indukcja niedoczynności tarczycy przez podawanie PTU. Niedoczynność tarczycy u 8-tygodniowego mężczyzny WT, MuRF1. /. I MuRF3. /. myszy (n = 6 każda) indukowano przez podawanie PTU, powszechnie stosowanego leku przeciwtarczycowego (24). Zwierzęta podzielono na 2 grupy; grupę uśmiercano po 2 tygodniach leczenia PTU (n = 3 każdy), a dietę PTU dla grupy 2 zmieniono na normalną karmę po 2 tygodniach leczenia PTU przez dodatkowe 2 tygodnie (n = 3 każdy). Myszy leczone PTU otrzymywały 0,15% paszy PTU (Harlan Teklad). WT, MuRF1. /. I MuRF3. /. myszy, które otrzymywały regularną paszę i wodę pitną przez 4 tygodnie podawane jako kontrole (n = 3 każda). Serca zamrożono błyskawicznie w ciekłym azocie i przechowywano w temperaturze <80 ° C do dalszej analizy. Pomiary zmęczenia mięśni. Pomiary zmęczenia mięśni przeprowadzono jak opisano wcześniej (50). W celu porównania funkcji mięśniowej WT, analizowano myszy MuRF1a / a, MuRF3a / a i DKO, samic płci męskiej i żeńskiej oraz myszy w tym samym wieku. Mięśnie podskórne i prostowników długich były izolowane od znieczulonych myszy i natychmiast osadzone między nieruchomym zaciskiem u podstawy łaźni narządowej z płaszczem wodnym i izometrycznym przetwornikiem siły Grassa FTO3C. Mięśnie równoważono przez 15 minut w natlenionym (95% O2 i 5% CO2) fizjologicznym roztworze soli zawierającym 120,5 mM NaCl, 4,8 mM KCl, 1,2 mM MgSO4, 1,5 mM CaCl2, 1,2 mM Na2PO4, 20,4 mM NaHCO3, 10 mM dekstrozy, i mM pirogronianu, w 30 ° C i pH 7,6. Mięśnie dostosowano do optymalnej długości, a następnie 30 minut odpoczynku. Mięśnie następnie stymulowano przy 100 Hz, aż siła wyjściowa spadła do 10% początkowego poziomu. Czas potrzebny do osiągnięcia 10%, 30% i 50% początkowej siły został zmierzony i wykorzystany jako wskaźnik męczliwości mięśni. Rozwój siły w milinewtonach został znormalizowany do masy mięśniowej w miligramach. Histologia i analizy mikroskopowe elektronowe [więcej w: tomografia komputerowa gdynia, olej kokosowy organiczny, rozdrabniacz uniwersalny ] [przypisy: światowe centrum słuchu kajetany, pizza hawajska składniki, wrzodziejące zapalenie jelita grubego objawy ]