Kumulacja miozyny i miopatia mięśni poprzecznie prążkowanych wynikają z utraty palca 1 i 3 mięśnia ad 5

Wolny MHC ulega podwyższeniu w sercu w odpowiedzi na niedoczynność tarczycy. W celu dalszego zbadania zdolności MuRF1 i MuRF3 do pośredniczenia w zależnym od ubikwityny obrocie. / Wolnym MHC in vivo, indukowaliśmy ekspresję a / wolnego MHC w sercu przez podawanie propylotiouracylu (PTU), inhibitora biosyntezy T3 (24 ), myszom MuRF1 (3, / Mu, MuRF3 (3 / i WT przez 2 tygodnie (Figura 5A). Użyliśmy tylko pojedynczych zmutowanych myszy MuRF do indukowania a / wolnego MHC w sercu z PTU, ponieważ ilość. / Powolnego MHC w pojedynczej zmutowanej myszy MuRF jest podobna do tej u myszy WT (Figura 5A) i ponieważ myszy DKO miały wysoka podstawowa zawartość a / wolny MHC w sercu (Figura 3E). Niedoczynność tarczycy doprowadziła do porównywalnego wzrostu a / wolnego MHC (Figura 5A) i zmniejszenia mRNA a-MHC (figura 5B) w sercach WT, MuRF1a / p, i MuRF3a / r. myszy. Po wycofaniu PTU przez 2 kolejne tygodnie, porównaliśmy ilość / powolnego białka MHC obecnego jako odczyt dla / powolnej degradacji MHC w sercu. Chociaż. / Wolny mRNA MHC zmniejszył się w WT, MuRF1a /. I MuRF3a /. serc do podobnych poziomów, zawartość. / powolnego białka MHC była podwyższona w sercach MuRF1. /. i MuRF3. /. zmutowane myszy w porównaniu z myszami z miotu WT (Figura 5C). To odkrycie sugeruje, że brak MuRF1 lub 3 prowadzi do zmniejszenia degradacji. / Powolnego MHC w sercu in vivo. Figura 5MuRF1 i MuRF3 pośredniczą w metabolizmie białka MHC in vivo. (A i B) PTU podawano przez 2 tygodnie w celu indukcji ekspresji a / wolnego MHC w WT, MuRF1a / p, i MuRF3a / r. sercach myszy (n = 6 każdy). Ekspresję mRNA y / powolnego MHC (A) i (3-MHC (B) oceniano za pomocą analizy PCR w czasie rzeczywistym zwiększono i zmniejszono odpowiednio do poziomów porównywalnych po 2 tygodniach leczenia PTU we wszystkich genotypach. Zakończenie podawania leczenia PTU doprowadziło do normalizacji ekspresji mRNA y / wolnej MHC i a-MHC. (C) Immunoblotting białek z serc WT, MuRF1a / y i MuRF3a /. myszy wykazywały zmniejszoną degradację a / wolne MHC w MuRF1a /. i MuRF3. /. w porównaniu z myszami WT. Przeciwciało anty-tubulinowe zastosowano jako kontrolę. (D) Immunobloty lizatów z mioblastów C2C12 (MB) i różnicujące miotuby (MT, dni różnicowania wskazano na górze) transfekowane MuRF1-myc lub MuRF3-myc, przy użyciu przeciwciała anty-MHC wykazują zmniejszoną zawartość MHC, gdy MuRF1 lub MuRF3 byli koekspresyjni. Jako kontrolę stosowano transfekcję pcDNA3.1. Jako kontrolę różnicowania stosowano anty-myogeninę, a przeciwciała anty-myc i anty-tubulinowe stosowano jako kontrole dla danych wejściowych. MuRF1 i MuRF3 pośredniczą w zwiększonej degradacji miozyny in vitro. Aby dodatkowo zbadać zdolność MuRF1 i MuRF3 do promowania degradacji miozyny, nadmiernie eksprymowaliśmy MuRF1 lub MuRF3 w mioblastach C2C12 i analizowaliśmy ekspresję białka MHC podczas różnicowania miotubuliny, które występuje, gdy gromadzą się białka MHC (25). Zaobserwowaliśmy mniejszą akumulację MHC w różnicowaniu miotubuł C2C12 w obecności MuRF1 lub MuRF3, co sugeruje, że MuRF1 i MuRF3 hamują akumulację MHC w komórkach mięśni szkieletowych (Figura 5D), podczas gdy ekspresja miogeniny była podobna w kontrolnych komórkach i komórkach wyrażających białko MuRF, wskazując, że ekspresja MuRF nie blokowała różnicowania miotubul (Figura 5D). Omówienie Wyniki tego badania pokazują, że MuRF1 i MuRF3 działają redundantnie, aby kontrolować zależną od ubikwityny degradację (3 / wolnych białek MHC i MHCIIa w mięśniach poprzecznie prążkowanych. Delecja zarówno MuRF1, jak i MuRF3 u myszy powoduje nieprawidłową akumulację grubych włókien MHC i ultrastrukturalne nieprawidłowości w mięśniach szkieletowych i mięśniu sercowym, co powoduje poważne pogorszenie funkcji mięśni. Ten fenotyp i jego konsekwencje przypominają ludzką miopatię MSM, jak również przerostową kardiomiopatię, z których obie zostały połączone z mutacjami w obrębie genu MYH7, który koduje p / wolne białko MHC (26. 33). Jednakże, w przeciwieństwie do ludzkiego MSM, który jest ograniczony do myofibrów typu I, nie znaleźliśmy fenotypu z ograniczeniem typu włókna w mięśniu szkieletowym DKO. Ta różnica w stosunku do klasycznego MSM, która jest spowodowana przez mutację genu MYH7 kodującego a / wolny MHC (który jest ograniczony do mięśnia sercowego i miofibry typu I), odzwierciedla brak swoistości typu włókien ekspresji MuRF1 i MuRF3, jak również ich widoczna zdolność do ubikwitynacji MHCIIa i P / wolne MHC. Zatem nie oczekuje się fenotypu restrykcyjnego typu włókna u myszy DKO. Ponadto, nie wszyscy pacjenci z MSM wykazują miopatię zarówno mięśnia szkieletowego, jak i serca (26. 33), podczas gdy obydwie mięśnie były dotknięte u naszych myszy DKO. Pomimo tych różnic uważamy, że nagromadzenie miozyny i zmniejszone działanie dotkniętego mięśnia uzasadniają opis fenotypu myszy DKO jako MSM. Mechanizmy pośredniczące w degradacji białek sarcomerycznych są przedmiotem intensywnego zainteresowania (34)
[podobne: czy pasujemy do siebie test, ursus 8014h, okulistyka ceglana katowice ]
[patrz też: rozdrabniacz uniwersalny, ursus koszalin, ursus 8014 ]