Hematopoetyczne komórki macierzyste rozmnażają się do momentu narodzin i wykazują odwracalną wadę wszczepienia w fazie czesc 4

Aby zbadać tę możliwość, populacja G1 / S / G2 / M Ter119. Komórki FL 14,5-dpc podzielono na frakcje składnika G1 i S / G2 / M, a każdy z tych 2 podzestawów testowano oddzielnie dla CRU. W tym przypadku, ustawienia bramek wybrane do rozdzielenia komórek fazy G1 (2n DNA) i fazy S (> 2n DNA) zostały potwierdzone przez profile uzyskane podczas sortowania komórek wybarwionych jodkiem propidyny (PI) i ponownie przeanalizowane przez FACS (rysunek 4A). Figura 4Hst / posortowane w PyK HSC przedstawiają bezwzględny, lecz przejściowy defekt wszczepienia S / G2 / M. (A) Ter119. Komórki FL o masie 14,5-dpc w G1 / S / G2 / M podzielono na ich podzbiory składowe G1 i S / G2 / M, pozostawiając niewielki rozdział między nimi. Próbki posortowanych podzbiorów następnie wybarwiono PI, jak również Hst / Py (dane nie pokazane). Posortowane komórki hodowano przez 6 godzin, a następnie ponownie wybarwiono PI. Stwierdziliśmy, że podczas tego 6-godzinnego okresu hodowli około jedna trzecia komórek pierwotnie w G1 ulegała progresji do S / G2 / M, a podobny odsetek komórek pierwotnie w S / G2 / M ulegał progresji do G1. (B) CRU na 105 początkowych Ter119. Komórki FL dla frakcji G1 i S / G2 / M przed i po 6 godzinach w hodowli. Wystąpiła 3,5-krotna utrata CRU, gdy komórki G1 były hodowane przez 6 godzin, ale bez utraty, gdy hodowane komórki zostały ponownie posortowane na komórki G1 (P = 0,36). Odwrotnie, wykryliśmy ponad 65-krotny wzrost liczby CRU wykrytych, gdy CRU w S / G2 / M były hodowane i ponad 128-krotny wzrost, gdy hodowane komórki zostały posortowane na komórki G1. IF, intrafemoral. Wartości są średnie. SEM wyników z co najmniej 3 eksperymentów. * P <0,01, ** P <0,001 względem odpowiednich typów komórek przed hodowlą. Cała aktywność CRU wykrywalna we frakcji G1 / S / G2 / M Ter119. Komórki FL o pojemności 14,5-dpc były ograniczone do podzbioru G1 (rysunek 4B i rysunek 5A). Podobne eksperymenty przeprowadzone z lin. 3-wk. Komórki BM pokazały, że części CRU w populacji G1 / S / G2 / M z tego źródła były również ograniczone do frakcji G1 (Figura 5A i dane nie pokazane). Warto zauważyć, że defekt S / G2 / M był specyficzny dla komórek repopulujących zdolnych do produkcji potomstwa we wszystkich liniach przez co najmniej 16 tygodni. Przeciwnie, komórki o krótkotrwałej aktywności repopulacyjnej (8 tygodni) łatwo wykryto we frakcji S / G2 / M, jak również w frakcji G1, potwierdzając w ten sposób ograniczenie wady zależnej od cyklu komórkowego zależnej od komórek z utrzymującą się multilineage aktywność repopulacyjna (34, 35). Figura 5 Defekt nabłonka HSC w S / G2 / M koryguje się przez traktowanie gospodarza, ale nie komórek, za pomocą SDF-1G2. (A) Wpływ wstrzykiwania przyszłych biorców 2 godziny po naświetlaniu i 2 godziny przed przeszczepieniem 10 ng / ml SDF-1G2 (+) lub PBS (a). Wyjściowe ekwiwalenty 4000 komórek G1 na mysz biorcy lub 12 000 komórek S / G2 / M na mysz biorcą były podobnie testowane. Zarówno 14,5-dpc FL, jak i 3-tygodniowe HS HSs w S / G2 / M wszczepiono tylko wtedy, gdy przeszczepiono je biorcom potraktowanym SDF-1G2a, podczas gdy leczeni biorcy nie byli bardziej skłonni do długotrwałego wszczepienia przez HSC w G1 niż nieleczeni biorcy . Wyniki są łączone z 3 niezależnych eksperymentów. (B) Wpływ obróbki in vitro sortowanego Ter119. Komórki FL w G1 lub S / G2 / M przez 30 minut w temperaturze 37 ° C w pożywce bez surowicy plus wskazane dodatki w wykrywaniu CRU. Leczenie in vitro nie miało znaczącego wpływu na liczbę myszy, które następnie wykazały ponowne zasiedlanie wielonasiepozmiórkowe z komórek wyjściowych w G1 lub S / G2 / M. Wyniki są łączone z 3 niezależnych eksperymentów. Aby określić, czy widoczny defekt wszczepienia proliferujących CRU był odwracalny, najpierw zbadaliśmy zawartość CRU w porcjach tych samych izolowanych komórek G1 i S / G2 / M po ich inkubacji przez 6 godzin w 37 ° C w pożywce bez surowicy. zawierający 50 ng / ml SF. W tym czasie wiele komórek G1 ulegało progresji do S / G2 / M, a wiele komórek S / G2 / M przemieszczało się do G1, jak widać na podstawie ich zmienionych profili barwiących PI (Figura 4A) i Hst (danych nie pokazano). Testy in vivo wykazały, że aktywność CRU ponownie pojawiła się, gdy komórki S / G2 / M hodowano przez 6 godzin, podczas gdy aktywność CRU pierwotnie obecna w komórkach G1 została częściowo utracona (Figura 4B). Następnie zapytaliśmy, czy niezdolność przeszczepionych dożylnie CRU w S / G2 / M do wszczepienia myszy biorcy może zostać przezwyciężona przez wstrzyknięcie komórek bezpośrednio do przestrzeni BM kości udowej. Jednak nie wykryliśmy żadnych części CRU po wstrzyknięciu domacicznym w tym podzbiorze Ter119. Komórki FL 14,5-dpc (Figura 4B), chociaż numery CRU mierzone w odpowiednich komórkach G1 11,5-dpc FL po wstrzyknięciu domięśniowym były takie same jak po przeszczepie dożylnym (1 na 3,6 × 103 i na 3,8 × 103 komórek, odpowiednio ). Defekt wszczepienia komórek HSC S / G2 / M przezwycięża się przez wstępne traktowanie gospodarza antagonistą CXCL12. Poprzednie raporty pokazały, że CXCL12 może promować zarówno mobilizat [podobne: ursus 11054, ursus 8014, nafta kosmetyczna z olejkiem rycynowym ] [hasła pokrewne: ursus koszalin, ursus 8014, nafta kosmetyczna z olejkiem rycynowym ]