Dysfunkcja cholinergiczna w mysim modelu choroby Alzheimera jest odwracana przez anty-A przeciwciało ad

Analiza kinetyczna wychwytu choliny o wysokim powinowactwie do synaptosomów przygotowanych z hipokampa myszy PDAPP wykazała znaczny wzrost Vmax bez żadnego mierzalnego wpływu na Km. Zaobserwowaliśmy również wyraźny wpływ A (42 na wychwyt choliny o wysokim powinowactwie w synaptosomach szczurzych hipokampów lub błonach wytworzonych ze stabilnej linii komórkowej wyrażającej ludzki transporter choliny (ChT-1). Dodatkowo, wykorzystaliśmy koimmunoprecypitację, a następnie analizę Western blot, aby ustalić, że A. może bezpośrednio wiązać się z ChT-1 i potencjalnie ingerować w jego normalną rolę fizjologiczną. Wreszcie, ostre traktowanie myszy PDAPP anty-A. przeciwciało m266 jest zdolne do pełnego przywrócenia tonu cholinergicznego i zaburzenia uczenia przyzwyczajenia, co sugeruje, że jeśli ten sam rozpuszczalny cholinotoksyczny. gatunek A. są zaangażowane w deficyty pamięci związane z wczesną AD lub łagodnymi zaburzeniami poznawczymi, a następnie bierne podawanie z anty-A. przeciwciała mogą mieć podobne korzystne efekty w klinice. Wyniki Podstawowe uwalnianie i poziomy tkankowe hipokampa ACh są zmniejszone u myszy PDAPP. Najpierw bezpośrednio ocenialiśmy uwalnianie ACh w hipokampie młodych myszy (myszy z płytką płaską) PDAPP i myszy WT w warunkach stanu stacjonarnego z zastosowaniem mikrodializy in vivo i stwierdzono, że podstawowe poziomy uwalniania ACh hipokampa były znacznie zmniejszone u myszy PDAPP w porównaniu z wiekiem i tłem. kontrolowane WT (Figura 1A; P <0,05). Ponieważ mikrodializa in vivo mierzy pozakomórkowe stężenia ACh, określiliśmy również poziomy tkankowe ACh w hipokampie i homogenaty korowe tych myszy. Podobne stężenia ACh mierzono u młodych myszy (w wieku 2 miesięcy), ale poziomy tkanek ACh były istotnie zmniejszone u myszy PDAPP w starszych wiekach (> 4 miesiące), co potwierdza, że obniżony poziom uwalniania ACh z hipokampa mierzony Mikrodializy in vivo odzwierciedlały te, które zmierzono bezpośrednio w homogenatach tkankowych (Figura 1, B i C, P <0,05). Fig. Poziom ekspresji APPh w hipercholesterolu i poziomy tkanek są zmniejszone u transgenicznych myszy PDAPP. (A) Podstawowe poziomy uwalniania ACh hipokampa mierzone przez mikrodializę in vivo z myszy transgenicznych WT i PDAPP (n = 7. 10 myszy na grupę, 4. 6 miesięcy). (B i C) Poziomy tkankowe ACh z hipokampa (B) i kora (C) myszy PDAPP i WT (n = 6 myszy na grupę). * P <0,05 względem WT. Wywołane uwalnianie ACh jest rozregulowane u myszy PDAPP. Następnie określiliśmy funkcjonalną odpowiedź neuronów cholinergicznych hipokampa u myszy PDAPP i WT po prowokacji farmakologicznej (ogólnoustrojowe podanie skopolaminy) lub fizjologicznej (ekspozycja na nowe środowisko). Wykazano, że oba warunki zwiększają wypływ hipokampa ACh i stanowią wiarygodny wskaźnik reaktywności funkcjonalnej układu cholinergicznego (18). Jak wcześniej podano, kiedy myszy WT są umieszczane w nowym środowisku, sytuacja, która ma wywoływać fizjologiczne uwalnianie ACh, hipokampowy wypływ ACh wzrasta nieznacznie (. 50%), a następnie powraca do poziomów wyjściowych w ciągu 60 minut (18). Przeciwnie, gdy myszy PDAPP eksponowano na to samo nowe środowisko, poziom uwalniania ACh hipokampa był znacznie podwyższony i przedłużony, wzrastając ponad 2,5-krotnie przez prawie 90 minut, w porównaniu z poziomami uwalniania hipokampa ACh obserwowanymi u myszy WT. zmierzone w identycznych warunkach (Figura 2A, P <0,05). Po podaniu skopolaminy (0,3 mg / kg śródotrzewnowo), antagonisty receptora pan-muskarynowego, poziom uwalniania ACh (wynikający z blokady hamujących receptorów muskarynowych) z hipokampa myszy PDAPP był znacznie zmniejszony w porównaniu z podobnie traktowanymi myszami WT (fig. 2B; P <0,05). Przy wszystkich zmierzonych parametrach (tj. W warunkach podstawowych) i następujących po fizjologicznych (ekspozycja na nowość) lub farmakologicznych (po podaniu skopolaminy) bodźców, wypływ ACh z hipokampa myszy PDAPP znacznie różni się od wieku i tła dopasowane myszy WT (Figura 2). Figura 2 Występowanie Hepokomórkowej ACh u myszy PDAPP jest przywracane do poziomów WT po anty-A. leczenie. (A) Uwolnienie hipokampa ACh u transgenicznych myszy WT i PDAPP po ekspozycji na nowe środowisko (Nowość) i po traktowaniu myszy PDAPP anty-A. przeciwciało m266 (PDAPP + m266; 500 (ig ip). Strzałki wskazują czas, w którym mysz została umieszczona w nowym środowisku (nowość) i wróciła do ich klatki. (B) Uwalnianie ACh z hipokampa myszy WT i PDAPP po podaniu skopolaminy (0,3 mg / kg śródotrzewnowo) i po podaniu m266. n = 7. 10 myszy na grupę, 4. 6 miesięcy [więcej w: ursus 8014h, przetrząsarko zgrabiarka, rozdrabniacz uniwersalny ] [hasła pokrewne: szczecin szpital wojskowy, światowe centrum słuchu kajetany, pizza hawajska składniki ]