Dysfunkcja cholinergiczna w mysim modelu choroby Alzheimera jest odwracana przez anty-A przeciwciało ad 9

Sygnał wizualizowano za pomocą ulepszonej chemiluminescencji (Pierce Biotechnology). Uczenie się przyzwyczajenia. Aktywność lokomotoryczną jako miarę przyzwyczajenia się do nowego środowiska oceniano w klatkach do fotokomórek (San Diego Instruments), które składały się ze standardowej plastikowej klatki gryzoni (24 cm x 45,5 cm x 15,5 cm) otoczonej ramą ze stali nierdzewnej. Ramiona aktywności lokomotorycznej składały się z 7 wiązek fotokomórek na podczerwień umieszczonych wzdłuż długiej osi ramy, uniesionych 2 cm nad podłogą i rozmieszczonych w odległości 5,5 cm. Liczbę przejść przez klatki zdefiniowaną jako kolejne przerwy jednej wiązki, a następnie natychmiast przerwano sąsiednią wiązkę, rejestrowano przez system komputerowy podczas kolejnych 5-minutowych odstępów przez 60 minut i stosowano jako miarę spontanicznej lokomocji. Aktywność lokomotoryczną oceniano na zwierzętach, które były naiwne dla aparatury badawczej, ale były przyzwyczajone do pokoju testowego przez około godzinę przed pomiarami aktywności. Myszom PDAPP lub WT wstrzyknięto różne IgG (500 .g ip) lub nośnik i oceniano pod kątem aktywności lokomotorycznej 24 godziny później. analiza mRNA. Całkowity RNA wyizolowano z hipokampa myszy PDAPP w wieku 2 i 17 miesięcy (n = 6) po perfuzji roztworu soli fizjologicznej. Pokrótce, tkankę szybko usunięto i przechowywano na suchym lodzie do homogenizacji. Całkowity RNA wyizolowano przy użyciu zestawu RNeasy Mini Kit (QIAGEN) zgodnie z wytycznymi producenta. cDNA wytworzono z zastosowaniem układu do wstępnej amplifikacji Superscript (Invitrogen Corp.) do syntezy pierwszej nici zgodnie z protokołem producenta i następnie stosowano (w rozcieńczeniu 1: 100) jako matrycę do ilościowej amplifikacji PCR w czasie rzeczywistym. Zastosowano startery specyficzne dla ChT-1 (do przodu, 5a-CCAGCTTTTGGGTGCCTG, odwrotna, 5a-TGTGGAAGCTCCAATAGCTCC, sonda, 6FAM-TGATGGCTCTACCCGCCATATGC-TAMRA, sonda 20-pmol i 5-pmol). Warunki amplifikacji były następujące: 10 minut w 95 ° C, a następnie 40 cykli w 95 ° C przez 15 sekund i 60 ° C przez minutę w systemie detekcji sekwencji PerkinElmer Applied Biosystems SDS7700. Każda próbka była prowadzona w trzech powtórzeniach z nie odwróconą transkrybowaną matrycą służącą jako kontrola. Względny poziom mRNA ChT-1 obliczono metodą krzywej standardowej wykorzystując amplifikację GAPDH do normalizacji. Statystyka. Podstawowe wartości ACh i choliny w tkankach i mikrodializatach myszy PDAPP i WT w odpowiedzi na leczenie przeciwciałem oceniano za pomocą 2-biegunowego testu dla ucznia (Figura 1A i Figura 2C), dwuczynnikowego (ANOVA wieku genotypowego) ANOVA z powtarzanym miary (Figura 1, B i C) lub ANOVA jednokierunkowa (leczenie) (Figura 2D i Figura 5C). Dane dotyczące mikrodializ były również wyrażane i przedstawiane jako procentowa zmiana względem wartości wyjściowej (w oparciu o wartości przed traktowaniem) i analizowane za pomocą ANOVA 2-krotnego (czas ekspozycji) (Figura 2, A i B oraz Figura 5, A i B). We wszystkich przypadkach znaczące interakcje oceniano za pomocą testu Newmana-Keulsa dla wielokrotnych porównań. Dla eksperymentów wychwytu choliny o wysokim powinowactwie, dane analizowano za pomocą ANOVA 1-drożności (leczenie) lub 2-drożności (traktowanie x genotyp) i oceniano za pomocą testu Newmana-Keulsa dla wielokrotnego porównania. W celu uczenia się przyzwyczajania, średnie ambulacje podczas 60-minutowej sesji zostały użyte do porównania 2-kierunkowego (genotypowanie x), a następnie testu Tukey-Kramer dla wielokrotnych porównań. P <0,05 uznano za statystycznie istotny. Podziękowania Autorzy dziękują K. Svenssonowi, P. May, C. Felderowi i Y. Du za komentarze do rękopisu oraz D. Kogerowi i C. Salhoffowi za pomoc techniczną. Footnotes KR Bales i ET Tzavara w równym stopniu przyczynili się do tej pracy. Obecny adres ET Tzavara to: INSERM U-513, Créteil, Francja. Zastosowano niestandardowe skróty: A (3, amyloid a; ACh, acetylocholina; AD, choroba Alzheimera; APP, białko prekursorowe amyloidu; ChT-1, transporter choliny. Konflikt interesów: Wszyscy autorzy są lub byli zatrudnieni przez Eli Lilly and Company. [więcej w: ursus koszalin, olej kokosowy organiczny, polskie towarzystwo medycyny estetycznej ] [przypisy: rehabilitacja po złamaniu szyjki kości udowej, szczecin szpital wojskowy, światowe centrum słuchu kajetany ]