Dryf antygenowy jako mechanizm unikania guza niszczenia przez limfocyty T cytolityczne

Stwierdzono, że mutacje w wirusowych antygenowych epitopach lub dryfach antygenowych umożliwiają wirusom unikanie rozpoznawania zarówno przez limfocyty Ab i T. Nie jest jednak jasne, czy komórki nowotworowe mogą uniknąć rozpoznania immunologicznego poprzez dryf antygenowy. Tutaj pokazujemy, że terapia adopcyjna z zarówno monoklonalnymi, jak i poliklonalnymi transgenicznymi CTL, specyficznymi dla naturalnego antygenu nowotworowego, P1A, wybiera wiele mutacji w antygenowym epitopie P1A. Mutacje te poważnie zmniejszają rozpoznawanie antygenu nowotworowego przez komórki T za pomocą różnych mechanizmów, w tym modulacji oddziaływania MHC: peptyd i wiązania TCR z kompleksem peptydów MHC: peptyd. Wyniki te dostarczają pierwszych dowodów na unikanie guza w rozpoznawaniu komórek T przez dryf antygenowy, a zatem mają ważne implikacje dla strategii immunoterapii nowotworów. Wprowadzenie Jest dobrze ustalone, że zarówno neutralizujące Ab (1, 2), jak i cytotoksyczne limfocyty T mogą wybierać dla wirusowych wariantów ucieczki in vivo (3, 4). Jest to zwykle osiągane przez mutacje, które powodują zastąpienie jednego lub więcej AA w antygenowych epitopach, proces znany jako dryft antygenowy. Ostatnie badania ujawniły, że komórki T CD4 specyficzne wobec wirusa mogą także selekcjonować pod kątem wirusowych wariantów ucieczki in vivo (5). Podobnie jak wirusy, nowotwory mogą również ominąć komórki T cytolityczne in vivo (6). Opisane mechanizmy obejmują immunologiczną ignorancję (7, 8), indukcję klonalnej anergii komórek T specyficznych dla nowotworu (9), obniżenie ekspresji antygenu (10, 11) i utratę ekspresji antygenu nowotworowego (12). Zgodnie z naszą wiedzą wciąż nie jest jasne, czy mutacje w antygenowych epitopach nowotworowych przyczyniają się do unikania guza przez układ odpornościowy in vivo. Transgeniczne myszy eksprymujące receptory komórek T dla pojedynczego epitopu antygenowego odgrywają rolę instrumentalną w ustalaniu mutacji antygenowej jako mechanizmu wirusowej ucieczki rozpoznawania komórek T (3, 5). Ostatnio wyprodukowaliśmy transgeniczną linię myszy eksprymującą TCR swoisty dla antygenu nowotworowego P1A35-43 prezentowanego przez H-2Ld (P1CTL) (13) i odkryliśmy, że duże niezmodyfikowane guzy są wysoce oporne na terapię przy użyciu P1CTL (14, 15). W trakcie badania mechanizmu oporności dużych guzów często obserwowaliśmy nawroty nowotworów u myszy, które zareagowały korzystnie na terapię z dużą liczbą transgenicznych limfocytów T. Aby przeanalizować mechanizm unikania guza związanego z terapią komórkami T, systematycznie scharakteryzowaliśmy antygen P1A wśród nawracających nowotworów. Odkryliśmy duży zbiór wariantów nowotworów z mutacjami w obrębie epitopu P1A. Mutacje te zniosły rozpoznawanie limfocytów T przez komórki nowotworowe przez modulowanie wiązania peptydu z cząsteczkami MHC lub, co ważniejsze, wiązanie kompleksu MHC: peptyd z TCR. Wyniki te pokazują dryf antygenowy antygenów nowotworowych jako mechanizm do unikania guza w terapii CTL in vivo. Metody Zwierzęta doświadczalne. Opisano myszy transgeniczne eksprymujące TCR swoisty dla kompleksu antygenu nowotworowego H-2Ld: P1A35-43 (13). Transgeniczne myszy TCR krzyżowano wstecznie z myszami BALB / cByJ przez co najmniej dziewięć pokoleń, zanim zostały użyte w tym badaniu. Myszy BALB / c o ukierunkowanej mutacji genu RAG-2 zakupiono z Taconic Farms (Germantown, New York, USA). Produkcja TCR. transgeniczne myszy łańcuchowe. Transgeniczny wektor składający się z. łańcuch TCR z klonu CTL reaktywnego wobec P1A został opisany (13). Sekwencja wektora niezwiązana z TCR została usunięta przed wstrzyknięciem do zapłodnionych komórek jajowych myszy FVB / N. Założyciel myszy badano przesiewowo za pomocą PCR z użyciem starterów dla zmienionego segmentu VJ wektora transgenicznego i przez cytometrię przepływową łańcucha V. 8 na powierzchni limfocytów krwi obwodowej, jak opisano (13). Linie komórkowe. Transfekowany H-2Ldy, transporter związany z komórkami RMA-S z niedoborem przerobu antygenu . był produkowany i dostarczany przez Ted Hansen (Washington University, St. Louis, Missouri, USA) (16). Opisano plazmazę BALB / c J558 transfekowaną wektorem pSV (J558-Neo) (14). W celu wyizolowania komórek nowotworowych z tkanek ex vivo nowotwory usunięto chirurgicznie i przygotowano zawiesiny pojedynczych komórek przez zmielenie tkanek nowotworowych na dwóch oszronionych szkiełkach. Po usunięciu resztek nowotworowych, żywe komórki wzbogacono przez wirowanie przez podłoże Ficoll-Paque. Komórki nowotworowe hodowano w pożywce RPMI zawierającej 5% FCS przez tydzień, zanim zastosowano je do cytometrii przepływowej i analizy molekularnej genu P1A. Adopcyjne przeniesienie oczyszczonych transgenicznych komórek T. Pule komórek śledziony i węzłów chłonnych myszy transgenicznych P1CTL inkubowano z koktajlem mAb (mAb anty-CD4 GK1,5, mAb anty-FcR 2,4G2 i mAb anty-CD11c N418).
[przypisy: rozmowa kwalifikacyjna przykład, okulistyka ceglana katowice, przetrząsarko zgrabiarka ]
[patrz też: okulistyka ceglana katowice, prawo wykonywania zawodu lekarza, polskie towarzystwo medycyny estetycznej ]