Dryf antygenowy jako mechanizm unikania guza niszczenia przez limfocyty T cytolityczne cd

Gdy nowotwory osiągnęły rozmiar 1,2 1.4 1,4 cm średnicy, adopcyjnie przenosiliśmy oczyszczone P1CTL do myszy z nowotworem. W tym momencie nowotwory rosłyby progresywnie u nieleczonych myszy, a eutanazja byłaby konieczna w ciągu tygodnia (14). Terapia P1CTL przedłużałaby żywotność myszy, chociaż nie uzyskano leczenia dużych guzów (14). Jak pokazano na ryc. 1a, zaobserwowano zmniejszenie o ponad 60% objętości guza w ciągu tygodnia od przeniesienia komórek T. Badanie histologiczne ujawniło, że przeważająca większość masy guza składała się z nekrotycznych komórek nowotworowych, chociaż znaleziono niewielką liczbę żywotnych komórek nowotworowych (dane nie przedstawione). Jednak kurczenie się guza utknęło w ciągu następnych 2 tygodni. Począwszy od trzeciego tygodnia, nowotwory ponownie pojawiły się u wszystkich leczonych myszy. Następnie rozpoczęliśmy nową rundę transferu transgenicznych limfocytów T. Jednak guzy nie reagowały już na leczenie limfocytami T. Figura Terapia adoptywna transgenicznymi limfocytami T specyficznymi wobec P1A selekcjonuje komórki nowotworowe oporne na komórki T. (a) Leczenie dużych guzów wykazujących ekspresję P1A transgenicznymi limfocytami T powoduje gwałtowny skurcz nowotworów, a następnie stagnację i wznowienie wzrostu guza. Komórki nowotworowe J558-Neo (5 x 106) wstrzyknięto podskórnie do RAG-2 | 3 / | Myszy BALB / c. Dwa do trzech tygodni później, gdy guzy osiągnęły 1,2. 1,4 cm średnicy, oczyszczone transgeniczne komórki T (5 x 106 / mysz) wstrzyknięto dożylnie. Leczenie powtórzono w dniu 31, kiedy guzy powróciły do swojej wielkości przed leczeniem, jak wskazano strzałkami. Myszy poddano eutanazji w 39 dniu (n = 4). (b) Komórki nowotworowe wyizolowane po dwóch traktowaniach były odporne na cytolizę przez aktywowane komórki T specyficzne względem P1A. Komórki nowotworowe wyizolowano od dwóch różnych myszy i porównano z macierzystymi komórkami nowotworowymi J558-Neo pod względem ich podatności na cytolizę w 6-godzinnym teście cytotoksyczności. Przedstawione dane są reprezentatywnymi dwoma eksperymentami. A, AvaII; F, Fnu4HI; U, uncut. (c) Ekspresja P1A nie została utracona w komórkach nowotworowych opornych na P1CTL. DNA pierwszej nici wytworzono z całkowitego RNA przy użyciu odwrotnej transkryptazy i zamplifikowano za pomocą starterów specyficznych dla GAPDH (produkt o 700 bp) lub P1A (produkt o 500 bp). (d) Normalna ekspresja H-2Ld na powierzchni komórek nowotworowych opornych na CTL. Histogramy przedstawiają wiązanie odczynnika drugiego etapu (linie kropkowane) lub mAb swoistego dla H-2Ld, a następnie odczynnika drugiego etapu (linie ciągłe). E / T, stosunek efektora do celu. Wyizolowaliśmy komórki nowotworowe od dwóch z czterech myszy, które otrzymały dwie rundy terapii CTL i przetestowały ich podatność na cytolizę przez aktywowane transgeniczne komórki T in vitro. Dane na Figurze 1b wskazują, że podczas gdy macierzyste komórki nowotworowe były łatwo zabijane przez P1CTL, te wyizolowane z dwóch nowotworów opornych na limfocyty T były całkowicie oporne na leczenie. Analiza RT-PCR wskazała, że transkrypty antygenu nowotworowego P1A ulegały ekspresji w obu liniach guza (Figura 1c). Co więcej, obie linie wyrażały H-2Ld na powierzchni komórki na poziomach porównywalnych do poziomów stwierdzonych na komórkach J558-Neo (Figura 1d). Wyniki te pokazują, że terapia P1CTL wybiera dla wariantów nowotworu, które są oporne na P1CTL i przynajmniej dla dwóch testowanych tu odpornych linii nowotworowych, oporność nie jest spowodowana brakiem MHC na powierzchni komórki lub utratą ekspresji genu P1A. Zmiany molekularne genów P1A w komórkach nowotworowych, które uniknęły monoklonalnej terapii limfocytami T. Izolowaliśmy i sekwencjonowaliśmy pięć klonów cDNA P1A z każdego produktu PCR na Figurze 1c. Wszystkie klony cDNA z nowotworów J558-Neo miały sekwencję P1A typu dzikiego (Figura 2a), podczas gdy te odzyskane z opornych na CTL linii komórek nowotworowych zawierały mutacje w obrębie epitopu P1A, peptyd 9-AA odpowiadający pozycjom 35. 43. przewidywanego białka P1A (17). Cztery z pięciu klonów wyizolowanych z Tum miało mutację, która zmieniła sekwencję AA w pozycji 6 (WR, z powodu mutacji punktowej TcC) epitopu P1A, określanego tu jako P1A (6R). Drugi miał mutację, która zmieniła sekwencję AA w pozycji 9 (F. L, również z powodu mutacji punktowej T. C), niniejszym nazwana P1A (9L). Wszystkie pięć klonów od Tum 2 to P1A (6R). Rycina 2 Zmiany molekularne w genie P1A nawrotowych nowotworów. (a) Chromatogramy reakcji sekwencjonowania zarówno cDNA, jak i genomowych produktów PCR. Mutacje w nukleotydach zaznaczono strzałkami, a zastąpione AA są zabarwione na czerwono. (b) Mapowanie enzymów restrykcyjnych subklonów wyizolowanych z rodzicielskich komórek J558-Neo lub z nawracających linii komórek nowotworowych Tum i Tum 2. AvaII rozpoznaje GGT (A) CC, który można wytworzyć w zmutowanym P1A (9L) ; Fnu4HI jest specyficzne dla GCNGC, który jest obecny w P1A (6R)
[hasła pokrewne: rozdrabniacz uniwersalny, polipektomia endoskopowa, pizza hawajska składniki ]
[więcej w: przetrząsarko zgrabiarka, rozdrabniacz uniwersalny, ursus koszalin ]