Dryf antygenowy jako mechanizm unikania guza niszczenia przez limfocyty T cytolityczne ad 6

Zarówno H-2Ld obciążone P1A (6R) – jak i P1A (9L) dały znaczące, aczkolwiek zmniejszone, wiązanie do transgenicznych komórek T. Znacznie zmniejszone wiązanie obserwowano dla H-2Ld: P1A (7P), podczas gdy H-2Ld: P1A (8G) nie wiązało się z P1CTL. Miareczkowanie kompleksu MHC: peptyd ujawniło, że mutacje P1A (6R) i P1A (9L) zmniejszały awidność między TCR a peptydem MHC o około 2- do 4-krotnie; podczas gdy H-2Ld: P1A (7P) wykazywał ponad 30-krotne zmniejszenie wiązania z P1CTL (Figura 6c). Redukcje wywołane przez wszystkie mutacje były istotne statystycznie (P1A względem P1A (6R), P = 0,035, P1A versus P1A (7P), P = 0,03, P1A versus P1A (8G), P = 0,0366, P1A versus P1A (9L), P = 0,0398). Figura 6 Wpływ zmiany peptydu na wiązanie specyficznych dla P1A komórek T z kompleksem peptydów H-2Ld: peptyd. H-2Ld: Ig, obciążony danymi peptydami, wstępnie inkubowano ze skoniugowanym z PE mAb anty-IgG1 i zastosowano do wybarwienia transgenicznych komórek śledziony w połączeniu ze skoniugowanym z FITC mAb anty-CD8. (a) Charakterystyka transgenicznych myszy eksprymujących TCR swoisty dla antygenu P1A nowotworu. Komórki śledziony izolowane z myszy transgenicznych barwiono albo na koekspresję CD8 i transgenicznego TCR (lewy panel) albo na specyficzność i czułość wiązania dimeru do dimeru peptydowego (centralny i prawy panel). (b) Wykresy punktowe przedstawiające wiązanie kompleksu MHC: peptyd z transgenicznymi komórkami T. Kompleksy peptydowe: H-2Ldlg zastosowano w rozcieńczeniu 1: 1, które składały się z .g H-2LdIg i 0,75 .g peptydów w 50 .l PBS. (c) Ilościowe porównanie awidności typu dzikiego i zmutowanego H-2Ld: kompleks P1A. Transgeniczne komórki śledziony wybarwiono odpowiednimi rozcieńczeniami H-2Ld z nadmiarem P1A typu dzikiego, zmutowanym P1A lub peptydami kontrolnymi. Przedstawione dane są średnimi intensywnościami fluorescencji bramkowanych komórek T CD8. Ten eksperyment powtórzono dwa do czterech razy. Istotność statystyczną określono za pomocą sparowanego testu t. Poliklonalne komórki T z transgenicznym TCR. łańcuch od reaktywnego z P1A klonu CTL wybranych wariantów antygenowych in vivo. Aby rozszerzyć nasze obserwacje od myszy z zasadniczo monoklonalnymi komórkami T, wytworzyliśmy transgeniczną linię myszy z TCR. łańcuch wyizolowany z klonu CTL reaktywnego względem P1A. Ponieważ nie ma transgenicznej. łańcuch jest obecny, transgeniczny. łańcuch musi łączyć się z endogennym. do wytworzenia kompleksu TCR / CD3 na powierzchni komórki. Jak pokazano na Figurze 7a, w generacji F1 transgenicznego założyciela i myszy BALB / c ponad 90% komórek T ulegało ekspresji transgenicznego TCR. łańcucha, jak ujawniono przez mAb specyficzne wobec Vs8. W rezultacie około 0.3% komórek T CD8 z TCR. transgeniczne myszy łańcucha związane z kompleksem H-2Ld: P1A (Figura 7a, dolny panel), podczas gdy nie zaobserwowano wiązania w limfocytach T CD8 z nietransgenicznych miotów z miotu (dane nie przedstawione). Aby sprawdzić, czy limfocyty T wyrażają transgeniczny TCR. łańcuch może powodować odrzucenie dużych guzów, my adoptowaliśmy przeniesione komórki śledziony z myszy transgenicznych i ich nietransgenicznych miotów z rodziny miotowatych do RAG-2 (3. /. myszy z dużymi guzami. Jak pokazano na Figurze 7b, transgeniczne komórki śledziony, ale nie te z ich nietransgenicznych miotów, spowodowały gwałtowny skurcz nowotworów. Jednak zasadniczo wszystkie guzy powróciły w ciągu 4 tygodni. Odpowiedź odrzucenia guza była związana ze znaczącą ekspansją reaktywnych wobec P1A komórek T CD8, ponieważ 10. 70% komórek T CD8 u myszy z nowotworem było H-2Ld: specyficzne dla P1A (Figura 7c). Przeanalizowaliśmy również V. zastosowanie limfocytów T CD8, które reagowały na H-2Ld: kompleks PIA za pomocą cytometrii przepływowej przy użyciu większości anty-V. Dostępne mAb. Nasze dane pokazują, że podczas gdy V. zastosowanie dla większości Ld: komórki T reagujące na PIA nie zostały zidentyfikowane ze względu na ograniczenie mAb ., komórki wyrażające V. 3, V. 4, V. 6, V. 8, V. 10, V. 11 V, 12 i V a13 można znaleźć wśród populacji Ld: PIA-reaktywna (dane nie przedstawione). Rysunek 7 W terapii adoptywnej, TCR. transgeniczne limfocyty T w łańcuchu osadziły silną odpowiedź CTL przeciwko epitopowi P1A35-43 prezentowanemu przez H-2Ld i spowodowały przejściowe odrzucenie dużych ustalonych guzów. (a) Ekspresja TCR P1CTL. łańcuch na więcej niż 90% komórek T, jak ujawniono przez koekspresję transgenicznego łańcucha V. 8 i CD3 lub CD8. Znacząca (choć niewielka) część komórek T CD8 reagowała specyficznie z kompleksem H-2Ld: P1A. (b) Leczenie adoptywne myszy z dużymi obciążeniami nowotworowymi za pomocą komórek śledziony z TCR. transgeniczne myszy łańcuchowe lub ich dzikiego typu, nietransgeniczne (Ntg) mioty z miotu. RAG-2. /. Myszy BALB / c przeszczepiono 5 x 106 komórek nowotworowych J558-Neo. Gdy nowotwory miały więcej niż 1,5 cm średnicy, dożylnie wstrzyknięto niesprutowane komórki śledziony z myszy dzikich lub transgenicznych z tego samego miotu.
[patrz też: olej kokosowy organiczny, tomografia komputerowa gdynia, ursus 8014h ]
[hasła pokrewne: wrzodziejące zapalenie jelita grubego objawy, olej kokosowy organiczny, polipektomia endoskopowa ]