Czynnik uwalniający histaminę ma prozapalną rolę w mysich modelach astmy i alergii czesc 4

Peptydy N19 i H3 blokują aktywację komórek tucznych. Analiza oczyszczonego rekombinowanego mHRF-His6 na redukującym i nieredukującym SDS-PAGE dała bezpośredni dowód na dimeryzację HRF związaną z mostkami disulfidowymi (dodatkowa figura 8A). Obie monomeryczne i dimeryczne formy HRF mogą wiązać się z IgE (dane nie przedstawione). Zgodnie z tym, monomeryczny mutant 2-mHRF, z 2 resztami cysteiny w pozycjach 28 i 172 podstawionych alaniną, również związał Igs (dodatkowa Figura 9, A i B). Zdolność HRF do dimeryzacji z 2 miejscami wiązania Ig sugeruje potencjał HRF do wiązania krzyżowego z receptorami Fc związanymi z Ig (Supplemental Figure 8B). To pojęcie było wspierane przez aktywację komórek tucznych przez współtworzenie z mHRF i reaktywnymi HRF, ale nie reaktywnymi względem HRF, IgE, o czym świadczy uwalnianie histaminy i produkcja cytokin z BMMC (Figura 4, B i C) i uwalnianie a-heksoaminidazy. z mastocytów otrzewnowych (C38-2 IgE, 17,8%> 4,6% uwalniania, C48-2 IgE, 2,4%> 0,1% uwalniania; P <0,0001). Reakcje te były hamowane przez GST-N19 i GST-H3 (Figura 4, D i E, i dane nie pokazane). Zgodnie z aktywacją komórek tucznych fosforylację tyrozyny kilku białek zaobserwowano w komórkach traktowanych C38-2 IgE / HRF (dane nie pokazane). Inhibitory HRF hamują pasywną skórną anafilaksję. Reakcje ostrej pasywnej skórnej anafilaksji (PCA) indukowane przez antygen u myszy uczulonych na IgE są mediowane głównie przez histaminę uwalnianą z aktywowanych komórek tucznych (36). LPR w skórze pośredniczy częściowo w wyniku TNF-a pochodzącego z komórki tucznej. (37, 38) i IL-33 (39). Co uderzające, kiedy HRF wstrzyknięto id 24 godziny po wstrzyknięciu IgE, zarówno ostre reakcje, jak i LPR indukowano reaktywnym względem HRF, ale nie reaktywnym względem HRF, IgE (Figura 5, A i B). Odczynnik HRF-reaktywny C38-2 IgE indukował zwiększoną przepuszczalność naczyń po wstrzyknięciu HRF (Figura 5A). Co ciekawe, LPR indukowane przez HRF, mierzone wzrostem obrzęku ucha po 6 godzinach, były tak wysokie, jak wywołane przez antygen (Figura 5B). Zarówno ostre reakcje, jak i LPR indukowane przez IgE / HRF, zapobiegano przez wstępne traktowanie GST-N19 (Figura 5C i dane niepokazane) i wydawało się, że są mediowane przez komórki tuczne, ponieważ reakcje zostały zniesione w zestawie KitWl / W z mastocytozą. myszy Sh (40) i przywrócono myszom KitWis / Shys wszczepionym BMX WT (Figura 5A). Ponadto, utrata FcRI zniosła odpowiedzi PCA (Figura 5D). Eksperymenty kontrolne wykazały niewielki wpływ samego GST lub GST-N19 na grubość ucha (dane nie pokazane). W związku z tym, HRE i reaktywne wobec HRF IgE mogą indukować odpowiedzi anafilaktyczne w komórce tucznej. i sposób zależny od FcyRI. Co ciekawe, reakcje PCA nie były indukowane przez mutant IgE / 2CA (Suplementowa Figura 9, C i D), a wywołane IgE / HRF reakcje PCA były hamowane przez mutanta 2CA (Suplementowa Figura 9E), co sugeruje, że dimeryczna postać HRF jest odpowiedzialny za bioaktywność HRF. Figura 5HRF promuje reakcje PCA u myszy uczulonych za pomocą reaktywnego wobec HRF IgE. (A) ostre reakcje PCA wywołane IgE / HRF. Myszy uczulono wskazanymi IgE. 24 godziny później, Evans blue i mHRF-His6 wstrzyknięto myszom uczulonym na IgE. Po 30 minutach zmierzono wyciek barwnika z uszu. Dla kontroli, solankę (Sal) i TNP26-BSA (Ag) wstrzykiwano w uczulone uszy. Myszy KitWis / Shys użyto przed lub 6 tygodni po wszczepieniu BMM WT przez wstrzyknięcie id. Barwienie błękitem toluidynowym potwierdziło, że wszczepione myszy miały liczbę komórek tucznych podobnych do myszy WT. (B. D) LPR wywołane przez IgE / HRF. mHRF-His6 wstrzyknięto w uszy uczulone IgE, a LPR analizowano przez pomiar grubości ucha po 6 godzinach. Do kontroli wstrzyknięto sól fizjologiczną i TNP26-BSA. (C) Myszy uczulone C38-2 IgE2 traktowano uprzednio solą fizjologiczną, GST lub GST-N19 (N19) przed wstrzyknięciem mHRF-His6. (D) LPR w Fc. Rl /. myszy. (E) Hamowanie wywołanych IgE / antygenem reakcji PCA przez GST-N19. Myszy WT uczulano przez noc na wskazane IgE. Lewe uszy wstrzyknięto GST, a prawe ucho wstrzyknięto GST-N19, następnie TNP26-BSA wstrzyknięto do obu uszu. Mierzona była grubość uszu. Wstawki pokazują obszar pod krzywą (AUC). * P <0,05, P <0,01, §P <0,001. Dla każdej kohorty użyto 3. 6 myszy. Dane są reprezentatywne dla eksperymentów 2 (A. D) lub 3 (E). Następnie zbadaliśmy, czy HRF przyczynia się do reakcji PCA wywołanych IgE / antygenem. Antygen wstrzykiwano do uszu myszy uczulonych na IgE, przy wstępnym traktowaniu GST-N19 lub GST. GST-N19 znacząco zmniejszał ostre reakcje PCA i LPR u myszy uczulonych za pomocą reaktywnego wobec HRF IgE (Figura 5E i dane nie pokazane) [patrz też: czy pasujemy do siebie test, tomografia komputerowa gdynia, ursus 8014h ] [patrz też: pizza hawajska składniki, wrzodziejące zapalenie jelita grubego objawy, salon ursus ]