Czynnik uwalniający histaminę ma prozapalną rolę w mysich modelach astmy i alergii czesc 4

Peptydy N19 i H3 blokują aktywację komórek tucznych. Analiza oczyszczonego rekombinowanego mHRF-His6 na redukującym i nieredukującym SDS-PAGE dała bezpośredni dowód na dimeryzację HRF związaną z mostkami disulfidowymi (dodatkowa figura 8A). Obie monomeryczne i dimeryczne formy HRF mogą wiązać się z IgE (dane nie przedstawione). Zgodnie z tym, monomeryczny mutant 2-mHRF, z 2 resztami cysteiny w pozycjach 28 i 172 podstawionych alaniną, również związał Igs (dodatkowa Figura 9, A i B). Zdolność HRF do dimeryzacji z 2 miejscami wiązania Ig sugeruje potencjał HRF do wiązania krzyżowego z receptorami Fc związanymi z Ig (Supplemental Figure 8B). Read more „Czynnik uwalniający histaminę ma prozapalną rolę w mysich modelach astmy i alergii czesc 4”

Czynnik uwalniający histaminę ma prozapalną rolę w mysich modelach astmy i alergii cd

GST-mHRF inkubowano z JK17 IgG w obecności lub nieobecności fragmentów Fab lub Fc przy różnych stosunkach molowych. Związane JK17 IgG wykryto sprzężonym z HRP przeciwciałem anty-. (C) lub skoniugowane z biotyną przeciwciało anty-IgG1, a następnie streptawidyna-HRP (D). (E i F) Współzawodnictwo przez Fab, ale nie Fc, fragmentów wiązania C38-2 IgE z HRF. GST-mHRF inkubowano z C38-2 IgE w obecności lub nieobecności fragmentów Fab lub Fc przy różnych stosunkach molowych. Read more „Czynnik uwalniający histaminę ma prozapalną rolę w mysich modelach astmy i alergii cd”

Czynnik uwalniający histaminę ma prozapalną rolę w mysich modelach astmy i alergii ad

W tym badaniu staraliśmy się zidentyfikować cząsteczki oddziałujące z HRF i inhibitory interakcji HRF z cząsteczkami reagującymi z HRF. Wyniki HRF wiąże się z fragmentami Fab podzbioru przeciwciał IgE i IgG. Pomimo wcześniejszych badań sugerujących, że IgE nie wchodzi w interakcje z HRF (34), ponownie zbadaliśmy tę możliwość za pomocą testu ELISA i panelu mAb IgE. Jak pokazano na Figurze 1A, unieruchomione na końcu N glutationowe S-transferaza znakowane. Tagged (znakowane GST) mysie białko HRF (określane tutaj jako GST-mHRF) wiązało C38-2 i 5 innych mAb IgE. Read more „Czynnik uwalniający histaminę ma prozapalną rolę w mysich modelach astmy i alergii ad”

Czynnik uwalniający histaminę ma prozapalną rolę w mysich modelach astmy i alergii

IgE-zależna aktywacja komórek tucznych i bazofilów leży u podstaw chorób alergicznych, takich jak astma. Czynnik uwalniający histaminę (HRF, znany również jako kontrolowane translacyjnie białko nowotworowe [TCTP] i fortilin) jest związany z reakcjami alergicznymi późnej fazy (LPR) i przewlekłym zapaleniem alergicznym, ale jego funkcje podczas astmy nie są dobrze poznane. W tym przypadku zidentyfikowaliśmy podgrupę przeciwciał IgE i IgG jako cząsteczek oddziałujących z HRF in vitro. HRF był w stanie dimeryzować i wiązać się z Igs poprzez oddziaływania jego N-końcowych i wewnętrznych regionów z regionem Fab Ig. Dlatego HRF wraz z reaktywnym wobec HRF IgE zdolne były do aktywacji komórek tucznych in vitro. Read more „Czynnik uwalniający histaminę ma prozapalną rolę w mysich modelach astmy i alergii”

Dryf antygenowy jako mechanizm unikania guza niszczenia przez limfocyty T cytolityczne ad 9

Na przykład mutacja w P6 zmniejsza wiązanie o mniej niż czterokrotne, ale zmniejsza aktywność peptydu w indukowaniu proliferacji i cytolizy o ponad 10 000 razy. Fakt, że umiarkowana różnica w zachłanności interakcji TCR-ligand ma drastyczny wpływ na konsekwencję rozpoznawania limfocytów T, został szczegółowo opisany i omówiony (31). Po drugie, i bardziej nieoczekiwanie, natężenie MHC: wiązanie peptydu z TCR nie zawsze dobrze koreluje z funkcją biologiczną peptydu. Zatem H-2Ld: P1A (7P) wiąże się znacznie mniej wydajnie niż H-2Ld: P1A (6R) ma, ale to P1A (7P), nie P1A (6R), może indukować proliferację komórek T. Jednym z możliwych wyjaśnień jest wyższa siła P1A (7P) w wiązaniu H-2Ld. Read more „Dryf antygenowy jako mechanizm unikania guza niszczenia przez limfocyty T cytolityczne ad 9”

Dryf antygenowy jako mechanizm unikania guza niszczenia przez limfocyty T cytolityczne ad 8

Ponieważ mutacja w obu allelach w większości klonów jest mało prawdopodobna, uważamy, że komórki nowotworowe J558-Neo mają prawdopodobnie tylko jedną kopię genu P1A. Ponieważ P1A został niedawno zmapowany do chromosomu X (25), hemizygotyczność genu może być spowodowana faktem, że komórki nowotworowe pochodzą od samców myszy (chociaż nasza analiza PCR dla markera chromosomu Y wskazała, że komórki J558-Neo brak chromosomu Y, dane niepokazane) lub utrata heterozygotyczności pięciu klonów podczas nowotworzenia. Pozorna heterozygotyczność może być spowodowana przypadkowym wysiewem dwóch niezależnych klonów do jednej studzienki. Powiązanym problemem jest to, czy komórki J558-Neo stosowane w bieżącym badaniu składają się z mieszaniny komórek o wysokiej częstotliwości mutacji w antygenowych epitopach P1A. Uważamy, że jest to mało prawdopodobne z trzech powodów. Read more „Dryf antygenowy jako mechanizm unikania guza niszczenia przez limfocyty T cytolityczne ad 8”

Dryf antygenowy jako mechanizm unikania guza niszczenia przez limfocyty T cytolityczne ad 6

Zarówno H-2Ld obciążone P1A (6R) – jak i P1A (9L) dały znaczące, aczkolwiek zmniejszone, wiązanie do transgenicznych komórek T. Znacznie zmniejszone wiązanie obserwowano dla H-2Ld: P1A (7P), podczas gdy H-2Ld: P1A (8G) nie wiązało się z P1CTL. Miareczkowanie kompleksu MHC: peptyd ujawniło, że mutacje P1A (6R) i P1A (9L) zmniejszały awidność między TCR a peptydem MHC o około 2- do 4-krotnie; podczas gdy H-2Ld: P1A (7P) wykazywał ponad 30-krotne zmniejszenie wiązania z P1CTL (Figura 6c). Redukcje wywołane przez wszystkie mutacje były istotne statystycznie (P1A względem P1A (6R), P = 0,035, P1A versus P1A (7P), P = 0,03, P1A versus P1A (8G), P = 0,0366, P1A versus P1A (9L), P = 0,0398). Figura 6 Wpływ zmiany peptydu na wiązanie specyficznych dla P1A komórek T z kompleksem peptydów H-2Ld: peptyd. Read more „Dryf antygenowy jako mechanizm unikania guza niszczenia przez limfocyty T cytolityczne ad 6”

Dryf antygenowy jako mechanizm unikania guza niszczenia przez limfocyty T cytolityczne ad 5

(c) Cytoliza komórek docelowych P388D1 pulsowanych danymi stężeniami peptydów wiążących H-2Ldy typu dzikiego, zmutowanych lub niespokrewnionych. E / T = 10. (d) Mutanty P1A nie wykazują aktywności antagonistycznej wobec P1CTL. Aktywowane komórki T specyficzne wobec P1A zastosowano jako efektorory. Docelowe komórki inkubowano wstępnie z mieszaniną P1A typu dzikiego (10 ng / ml) i wskazanymi stężeniami P1A lub peptydów kontrolnych zmutowanego lub dzikiego typu. Read more „Dryf antygenowy jako mechanizm unikania guza niszczenia przez limfocyty T cytolityczne ad 5”

Dryf antygenowy jako mechanizm unikania guza niszczenia przez limfocyty T cytolityczne czesc 4

Dwa enzymy nie zidentyfikowały żadnej mutacji w 37 klonach komórek nowotworowych J558-Neo. Jednak podzielili klony Tum na cztery grupy i klony Tum 2 na dwie grupy (pokazane na rysunku jako G1, G2, G3 i G4). Proporcja klonów w każdej grupie jest przedstawiona pod każdą fotografią. Wszystkie sugerowane mutacje Tum 2 i Tum oraz brak mutacji w klonach J558-Neo zostały potwierdzone przez sekwencjonowanie DNA. Sekwencjonowanie DNA ujawniło również, że niecięte subklony Tum 2 G2 zawierały dwie niezależne mutacje, P1A (7P) i P1A (8G). Read more „Dryf antygenowy jako mechanizm unikania guza niszczenia przez limfocyty T cytolityczne czesc 4”